SURE2 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats正向重復片段；Retroviral sequences 逆轉錄病毒序列；Stratagene;

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產品組分：

菌株描述

SURE2菌株是Agilent (Stratagene) SURE菌株的高效衍生菌，特別設計用于克隆在傳統的大腸桿菌中 “無法克隆”的某些DNA  p段。SURE菌株破壞了重組酶系統整條通路上的組分，這些組分能催化重組和刪除體內的非標準二級和三級結構，包括十字形（由反向重復序列引起）和Z字形的DNA，經常出現在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆進入傳統大腸桿菌菌株中。SURE2菌株含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其無法對外源DNA進行標記和限制，從而提高外源甲基化DNA的克隆效率。

也含內切酶缺陷（endA），和重組缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的穩定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株適用于藍白斑。SURE2菌株本身含卡那mei素、四環素和氯mei素特性。

SURE2菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr].

產品描述

本品是SURE2菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率＞1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上融化感受態細胞。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 轉化高濃度質?；蚋咝蔬B接產物可相應降低最終用于涂板的菌量。

5） 菌株本身含卡那mei素、四環素和氯mei素特性，攜帶此三種抗性的質粒不適合克隆到SURE2細胞。SURE2菌株能耐受＜40μg/ml氯mei素，但對100μg/ml 氯mei素很敏感。

6） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

7） 產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照實驗用。

8） 要想獲得大量高純度質粒，建議在TB培養基中搖菌培養（以pUC19為例，在TB培養液中過夜培養的菌體濃度和質粒產率是LB培養液的3~4倍，S.O.C培養液的~2倍）。

9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常規操作流程【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃取出感受態細胞，迅速插入冰中5min待其融化。

2） 向融化的感受態細胞中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用手輕彈混勻（避免用移液槍上下吹打），冰浴靜置25min。

3） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

4） 向每個離心管中加入700 μl無菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5） 5000rpm離心1min，留取100μl左右輕輕吹打重懸菌體，加到含相應抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃過夜培養。

【注意】：a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可將所有轉化產物涂布平板。b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少， 

附表1固體和液體LB培養基配方

附表2固體和液體2-YT培養基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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